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　　测定技术的基础在于抗原之间的特异结合反应，所以任何的诊断试剂离不开的原料，如抗原，酶等。以前用于测定的抗原通常为各种纯化抗原，而则为纯化抗原动物后的多克隆和使用杂交瘤技术的单克隆，而抗原或的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成制备。近年来，随着分子生物学的发展，使用基因工程制备各种特殊的抗原或及其酶结合物等测定试剂几成为现实的新一代试剂，各种新型使用的测定也不断出现。点击输入图片描述（最多30字）组成结构：1、 ：操作中避免任何细胞。使用不含热原和内的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。2、 ：EDTA、柠檬酸盐、肝素可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、 细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、 组织匀浆：将组织加入适量盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。5、 保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。此IBL试剂盒能用于小鼠,EDTA,细胞上清中白介素-6的定量检测试剂盒成分1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T2 酶标记: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 13 品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 24 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20BPS 30mL x 15标记稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 16显色剂: TMB底物液 15mL x 17 终止液: 1N 12mL x 18 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1操作说明1实验所需器材(但试剂盒没有提供)酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯去离子水冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C)洗瓶(用于洗板) 一次性试剂管(用于浓缩酶标记和显色剂)ELISA试剂盒的操作步骤如下：1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀释包被抗原至5μg/ml，酶标板中每孔加入50μl，室温、4℃或37℃过夜包被。2.洗涤：弃包被液（拍干，再用无尘纸吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗涤液洗板3次（每孔均要加满），每次3min~5min。3.封闭：每孔加封闭液（1%BSA）250μl，37℃封闭2h。4.洗涤：用1×PBST洗涤液洗板3次，每次3min~5min。5.结合一抗：用1×PBST缓冲液1∶1000稀释被检，每孔100μl，要设立阴性对照，37℃孵育1.5h。6.洗涤：同上。7.结合酶标二抗：每孔加1×PBST缓冲液1000倍稀释的酶标二抗羊抗鼠IgG-HRP（稀释倍数根据产品不同有所不同，可按说明书进行）50μl，37℃孵育1h.8.洗涤：同上。9.显色：每孔加底物溶液（TMB）50μl，置室温避光显色10min。10.待显色后，每孔加入50μl终止液（2mol/L H2SO4）终止反应。使用酶标仪读取450nm的OD值，以确定水平。以上步骤仅供参考，具体操作请根据实际情况和产品说明书进行。90分钟一步法ELISA试剂盒可以适用于、、组织匀浆、细胞上清液等样本类型。这些样本可以用于检测、和其他微生物等病原体，以及、自身性等病理情况。同时，ELISA试剂盒还可以用于检测浓度、维生素等营养，以及污染物等有害的残留量。需要注意的是，不同样本类型和检测项目可能对ELISA试剂盒的灵敏度和特产生影响，因此在选择使用ELISA试剂盒时需要根据具体情况进行选择。点击输入图片描述（最多30字）豚鼠生长因子(CTGF)ELISA试剂盒重复性好可定制试验原理试剂盒是固相夹心法酶联吸附实验（ELISA）.已知浓度的品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。自备材料1． 蒸馏水。2． 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3．振荡器及磁力搅拌器等。安全性1． 避免直接终止液和底物A、B。一旦到这些，请尽快用水冲洗。2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。4． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的品应丢弃，不可保存。5． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。6． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。7． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。8． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。9． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。10． 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光，避免长时间于光下。避免用手，有毒。实验完成后应立即读取OD值。11． 加入试剂的顺序应一致，以所有反应板孔温育的时间一样。12． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。点击输入图片描述（最多30字）豚鼠生长因子(CTGF)ELISA试剂盒重复性好可定制做好对照正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特反应，可采用羊、兔或BSA等封闭。实验条件的选择在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:（1）固相载体的选择：许多可作为固相载体，如聚氯、聚、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。（2） 包被（或抗原）的选择：将（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。（3）酶标记工作浓度的选择：用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记分别为不同的稀释度）在正式实验里准确地滴定其工作浓度。（4）酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。点击输入图片描述（最多30字）ELISA试剂盒检测中的注意事项1、要移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。有人员进行矫正。2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的后，要更换枪头。即使是吸取品时。3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更。4、实验时，要使底物避光保存。5、用枪吸取时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。6、吸取时，要用量程和需要量接近的枪去吸，误差。7、将加到酶标孔中时，避免枪头和孔内，可使枪头上的液滴和孔壁，液滴会自然流下去。8、全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀。也可以用酶标仪的晃动功能。9、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。10、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加。没有洗板机时，倒去后，要将酶标板在报纸或毛纸上拍干。11、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。12、底物是光的，要在临用前现配。13、检测前，要打开酶标仪，使之10分钟以上。14、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免。15、待检样品要澄清，否则会影响结果。16、温浴时间应遵守试剂盒规定。17、应尽量做双孔实验，这样才能数据的准确性。18、对结果有疑问的样品要用其它进行确证。

　　测定技术的基础在于抗原之间的特异结合反应，所以任何的诊断试剂离不开的原料，如抗原，酶等。以前用于测定的抗原通常为各种纯化抗原，而则为纯化抗原动物后的多克隆和使用杂交瘤技术的单克隆，而抗原或的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成制备。近年来，随着分子生物学的发展，使用基因工程制备各种特殊的抗原或及其酶结合物等测定试剂几成为现实的新一代试剂，各种新型使用的测定也不断出现。

　　1、 ：操作中避免任何细胞。使用不含热原和内的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。

　　2、 ：EDTA、柠檬酸盐、肝素可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

　　4、 组织匀浆：将组织加入适量盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。

　　5、 保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

　　8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1操作说明1实验所需器材(但试剂盒没有提供)酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯去离子水冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C)洗瓶(用于洗板) 一次性试剂管(用于浓缩酶标记和显色剂)

　　ELISA试剂盒的操作步骤如下：1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀释包被抗原至5μg/ml，酶标板中每孔加入50μl，室温、4℃或37℃过夜包被。2.洗涤：弃包被液（拍干，再用无尘纸吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗涤液洗板3次（每孔均要加满），每次3min~5min。3.封闭：每孔加封闭液（1%BSA）250μl，37℃封闭2h。4.洗涤：用1×PBST洗涤液洗板3次，每次3min~5min。5.结合一抗：用1×PBST缓冲液1∶1000稀释被检，每孔100μl，要设立阴性对照，37℃孵育1.5h。6.洗涤：同上。7.结合酶标二抗：每孔加1×PBST缓冲液1000倍稀释的酶标二抗羊抗鼠IgG-HRP（稀释倍数根据产品不同有所不同，可按说明书进行）50μl，37℃孵育1h.8.洗涤：同上。9.显色：每孔加底物溶液（TMB）50μl，置室温避光显色10min。10.待显色后，每孔加入50μl终止液（2mol/L H2SO4）终止反应。使用酶标仪读取450nm的OD值，以确定水平。以上步骤仅供参考，具体操作请根据实际情况和产品说明书进行。

　　90分钟一步法ELISA试剂盒可以适用于、、组织匀浆、细胞上清液等样本类型。这些样本可以用于检测、和其他微生物等病原体，以及、自身性等病理情况。同时，ELISA试剂盒还可以用于检测浓度、维生素等营养，以及污染物等有害的残留量。需要注意的是，不同样本类型和检测项目可能对ELISA试剂盒的灵敏度和特产生影响，因此在选择使用ELISA试剂盒时需要根据具体情况进行选择。

　　试剂盒是固相夹心法酶联吸附实验（ELISA）.已知浓度的品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。

　　4． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的品应丢弃，不可保存。

　　6． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

　　7． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

　　8． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

　　10． 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光，避免长时间于光下。避免用手，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

　　正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特反应，可采用羊、兔或BSA等封闭。

　　（1）固相载体的选择：许多可作为固相载体，如聚氯、聚、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。

　　（2） 包被（或抗原）的选择：将（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。

　　（3）酶标记工作浓度的选择：用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记分别为不同的稀释度）在正式实验里准确地滴定其工作浓度。

　　（4）酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。

　　1、要移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。有人员进行矫正。

　　2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的后，要更换枪头。即使是吸取品时。

　　3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更。

　　7、将加到酶标孔中时，避免枪头和孔内，可使枪头上的液滴和孔壁，液滴会自然流下去。

　　8、全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀。也可以用酶标仪的晃动功能。

　　10、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加。没有洗板机时，倒去后，要将酶标板在报纸或毛纸上拍干。

　　11、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。